镜检流程及注意事项(镜检的作用)

1. 镜检流程及注意事项

革兰氏染色法:细菌标本经图片、干燥、固定后，先用结晶紫溶液初染1min，水洗后以碘液媒染1min，水洗后用95%乙醇脱色至紫色不再脱褪，水洗后用稀释苯酚复红或沙黄复染0.5min，水洗，带玻片干燥后镜检。由此可见，影响革兰氏染色的关键步骤是脱色，染色结果的准确性与脱色时间长短有直接关系。

另外涂片太厚、太薄会使菌体分布不均；干燥温度过高会导致菌体变形；染液放置过久也影响染色效果；不同时期细菌标本或培养物，染色后结果也会所差异。

细菌染色时应选用新鲜或培养18-24h的细菌培养物。

2. 镜检的作用

简单来讲，洋葱表皮细胞装片的解离和压片都是为了获得单层细胞，便于观察。

3. 镜检的过程

 5.2.染色步骤: 5.2.1、干燥涂片,滴加A液布满涂片固定30秒,蒸馏水冲洗,待干或滤纸吸干。

 5.2.2、滴加或浸入工作液室温(如冬天室温低,需用37℃孵育)染色15～20分钟,蒸馏水冲洗,待干。

 5.2.3、F液复染1～2分钟,蒸馏水冲洗,干后镜检。

4. 镜检流程及注意事项有哪些

1、取用和放置 使用时首先从镜箱中取出显微镜，必须一手握持镜臂，一手托住镜座，保持镜身直立，切不可用一只手倾斜提携，防止摔落目镜。要轻取轻放，放时使镜臂朝向自己，距桌边沿5-10厘米处。要求桌子平衡，桌面清洁，避免直射阳光。

　　2、开启光源 打开电源开关。

　　3、放置玻片标本 将待镜检的玻片标本放置在载物台上，使其中材料正对通光孔中央。再用弹簧压片夹在玻片的两端，防止玻片标本移动。若为玻片移动器，则将玻片标本卡入玻片移动器，然后调节玻片移动器，将材料移至正对通光孔中央的位置。

　　4、低倍物镜观察 用显微镜观察标本时，应先用低倍物镜找到物像。因为低倍物镜观察范围大，较易找到物像，且易能找到需作精细观察的部位。其法如下：

　　(1)转动粗调螺旋，用眼从侧面观望，使镜筒下降，直到低倍物镜距标本0.5厘米左右为度。

　　(2)用左眼从目镜中观察，右眼自然睁开，用手慢慢转动粗调螺旋，使镜筒渐渐上升，直到视野内的物像清晰为止。此后改用微调螺旋，稍加调节焦距，使物像最清晰。

　　(3)用手前后左右轻轻移动玻片或调节玻片移动器，便可找到欲观察的部分。要注意视野中的物像为倒像，移动玻片时应向相反方向移动。

5. 镜检的正确操作

⒈取放时动作一定要轻，切忌震动和暴力，否则会造成光轴偏斜而影响观察，而且光学玻璃也容易损坏。

⒉由于物镜的螺丝口容易损伤，安装物镜时要特别小心，即先向左方倒转一小段，凹凸双方吻合后再向右方旋转，不要转的太紧，轻轻捻到头，再稍紧即可。

⒊镜检标本应严格按照操作程序进行，观察时要从低倍镜开始，看清标本后再转用高倍镜、油镜。

⒋使用油镜时一定要在盖玻片上滴油后才能使用。油镜使用完后，应立即将镜头、盖玻片上的油擦干净，否则干后不易擦去，以致损伤镜头和标本。但应注意二甲苯用量不可过多，否则，物镜中的树胶溶解，透镜歪斜甚至脱落，盖玻片移动甚至连同标本一起融掉。

⒌使用时不可用手摸光学玻璃部分，如需擦拭应严格按照光学部件擦拭办法。

⒍使用的盖玻片和载玻片不能过厚或过薄。标准的盖玻片为0.17±0.02毫米，载玻片为1.1±0.04毫米。过厚或过薄将会影响显微镜成像及观察。

开启偏光显微镜电源后，若暂时不使用，可以将显微镜灯光调至最暗，每次关闭偏光显微镜电源前，将显微镜灯光调至最暗，等灯箱完全冷却后（约15分钟后），将电源线卷好，而无需频繁开关偏光显微镜电源。

使用和移动仪器时，手握机架的手柄，缓慢推行，勿将承载臂、弹簧臂和机头同时置于仪器面板的背侧方向以防倾倒造成危险。、

使用与保管仪器的地方应保持清洁，注意防尘、防潮、防酸碱等有腐蚀易发物质的侵蚀。仪器使用完或长期不用时，应盖上防尘罩。

及时记录使用情况、性能、故障及解决办法，定期维修保养。

6. 镜检操作流程及注意事项

1. 确认病情：雇员需向公司、用人单位申报可能患上的职业病并通过医院检查进行病情确认。

2. 填写申请表：申请人须填写《职业病诊断确认申报表》。

3. 职业病诊断委员会评估：委员会会对申请人进行严格评估，包括了解工作环境、职业史等信息，并通过体检、血液检测、肺功能检测、X光检查、镜检及其它特殊检查等方式确定是否患上职业病。

4. 劳动能力鉴定：在确诊职业病后，参与劳动的能力也需要作出一个评估认定。

5. 发放鉴定结论：经过确认后，由职业病诊断委员会出具《劳动能力鉴定意见书》及《职业病诊断证明书》，并由申请人提交相关单位办理手续。

整个申请鉴定职业病的流程需要时效性较高，在报告职业病前，应及时就医做好病情记录，猝发职业病也可以先进行治疗，但需要及时向相关部门申报。具体时间取决于病情和评估安排等因素，一般需要1-2个月不等，需要根据实际情况来安排。

7. 镜检操作规范流程及操作注意事项

拍摄前作以下预备工作，调整显微镜至最佳状态。

1.光路合轴 使光轴与光束处于同一轴线上。

2.柯勒氏照明 使观察的视野获碍均匀而又充分的照明;防止杂散光对照相系统产生影响。

3.物镜与目镜合理组合 依标本的不同和显微摄影要求，物镜与目镜的组合有一定规范。

4.调整视场光阑和孔径光阑 使两者与所用物镜的数值孔径相等，所得的分辨力最高;视场光阑一旦调好，不要再动，而孔径光阑可随物镜数值孔径的更换，做相应的调整。

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拍摄步骤

拍摄是显微摄影系列操作中的关键环节，在镜检观察中，发现需要摄下的影像应即时拍照。

1.开启相机后盖，安装胶卷于照相机内。

2.打开显微镜照明装置的电源开关，将亮度调至适当。

3.依个人的视力，调整摄影目镜调焦环至“井”字线清晰。

4.放一片需要拍摄的标本载玻片于载物台上。在低倍镜下选好要拍摄的核型或细胞结构，再转换到油镜下，聚焦标本细节，准备拍照。

5.按下曝光按钮，曝光按钮亮表示曝光开始进行，熄灭表示曝光完毕。

6.拍摄记录

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胶片冲印步骤

感光胶片在拍摄完毕后，需尽快在暗室中冲洗和晒印，其方法和普通照像相似。

1. 把胶片装入显影罐中(切勿粘在一起)先用清水冲洗，排除气泡.然后再把水倒掉，这有利于显影液的快速均一作用。

2. 从顶部罐口注入预先配好的约250ml D-72式显影液。20℃显影4～12分钟。

3. 显影中轻轻摇影罐，使胶片表面充分受显影液作用，显影完毕，迅速倒出显影液。

4. 立即注入250ml预先配好的SB—I式停影液，停显时间为10秒，倒出停影液，随之加入250ml的F一5式酸性坚膜定影液，20℃定影15分钟。取出胶片流水冲洗30分钟以上。

5. 将胶片挂起，用脱脂棉轻轻吸掉胶片表面过多的积水，晾干。

6. 晾干后用放大机的胶片夹子夹住胶片，药膜面朝下，聚焦取景，然后在红灯条件下，用压纸板压住所需号放大像纸，药膜面向上.进行曝光(适当的曝光时间要经试验后决定)。

7. 曝光后的像纸，浸入D-72显影液中，然后用竹镊子不时地夹住像纸翻动，直到显影适度为止。

8. 显影合适后立即移到SB-I式停影液中，漂洗10～20秒，再浸入定影液中处理15分钟，取出在流水中冲洗60分钟左右。

9. 水洗后，放在电热上光机上烘干;裁边，装入有说明的纸袋内保存

8. 镜检的操作步骤

原理：革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法之所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是因为一般认为革兰氏染色是基于细菌细胞壁特殊化学组分进行染色的。

步骤：

(一)涂片固定

在干净的载玻片中央滴加一滴蒸馏水，用接种环进行无菌操作，挑取培养物少许，置载玻片的水滴中，与水混合做成菌悬液并涂布成直径约1cm的薄层。

(二)染色

在固定过的涂片菌膜上滴加草酸铵结晶紫染液，染色液应完全覆盖整个菌膜，染色1min。

(三)水洗

染色到一定的时间，拿住玻片使之成450角，用细小的水流把多余的染料冲洗掉，被菌体吸附的染料则保留。

(四)媒染

加碘液覆盖涂面染1 min。在媒染处理时，媒染剂与染料形成不溶性的化合物，可增加染料和细菌的亲和力。

(五)水洗，用吸水纸吸去水分

用细小的水流缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。

(六)脱色

加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色， 20 s~30 s后再进行水洗，吸去水分。

(七)复染

蕃红染色液染色10 s后， 自来水冲洗。

(八)干燥，镜检

染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。

扩展资料

标本干燥后即进行固定，固定的目的有三个：

(1)杀死微生物，固定细胞结构。

(2)保证菌体能更牢固的粘附在载玻片上，防止标本水洗时被水冲洗掉。

(3)改变染料对细胞的通透性，因为死的原生质比活的原生质易于染色。

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